Amidase (AMD)
Enzyme:Các đại phân tử đóng vai trò là chất xúc tác sinh học, hầu hết các enzyme đều là protein.
Amidase:Xúc tác quá trình thủy phân các amit béo và thơm nội sinh và ngoại sinh bằng cách chuyển nhóm acyl vào nước, tạo ra axit tự do và amoniac. Axit hydroxamic và các axit hữu cơ khác được sử dụng rộng rãi làm thuốc vì chúng là thành phần của các yếu tố tăng trưởng, kháng sinh và chất ức chế khối u. Các amidase có thể được chia thành acylase loại R và loại S dựa trên tính chọn lọc lập thể của chất xúc tác.
Ngoài việc xúc tác quá trình thủy phân amit, amidase cũng có thể xúc tác các phản ứng chuyển nhóm acyl khi có mặt các chất đồng xúc tác như hydroxylamine.
Các amidase có nguồn gốc khác nhau có đặc tính cơ chất khác nhau, một số chỉ có thể thủy phân amit thơm, một số chỉ có thể thủy phân amit béo, và một số thủy phân α- hoặc ω-amino amit. Hầu hết các amin chỉ có hoạt tính xúc tác tốt đối với amit mạch hở hoặc amit thơm đơn giản, nhưng đối với các amit thơm phức tạp, amit dị vòng, đặc biệt là amit có nhóm thế ở vị trí ortho, thường có hoạt tính thấp (chỉ một vài enzyme thể hiện hiệu quả xúc tác tốt hơn).
Cơ chế xúc tác:
| Enzyme | Mã sản phẩm | Mã sản phẩm |
| Bột enzyme | ES-AMD-101~ ES-AMD-119 | Một bộ gồm 19 amidase, mỗi loại 50 mg. 19 viên * 50mg/viên, hoặc số lượng khác. |
| Bộ dụng cụ sàng lọc (SynKit) | ES-AMD-1900 | Một bộ gồm 19 amidase, mỗi loại 1 mg. 19 sản phẩm * 1mg/sản phẩm |
★ Độ đặc hiệu chất nền cao.
★ Khả năng chọn lọc lập thể cao.
★ Hiệu suất chuyển đổi cao.
★ Ít sản phẩm phụ hơn.
★ Điều kiện phản ứng nhẹ nhàng.
★ Thân thiện với môi trường.
➢ Việc sàng lọc enzyme nên được thực hiện đối với các chất nền cụ thể do tính đặc hiệu của chất nền, và cần tìm ra enzyme xúc tác chất nền mục tiêu với hiệu quả xúc tác tốt nhất.
➢ Tuyệt đối không tiếp xúc với các điều kiện khắc nghiệt như: nhiệt độ cao, độ pH cao/thấp và dung môi hữu cơ có nồng độ cao.
➢ Thông thường, hệ phản ứng cần bao gồm chất nền, dung dịch đệm (pH tối ưu cho phản ứng của enzyme). Các chất đồng chất như hydroxylamine cũng cần có mặt trong hệ phản ứng chuyển nhóm acyl.
➢ Nên thêm AMD vào hệ phản ứng sau cùng, ở độ pH và nhiệt độ phản ứng tối ưu.
➢ Tất cả các loại AMD đều có điều kiện phản ứng tối ưu khác nhau, vì vậy mỗi loại cần được nghiên cứu kỹ hơn một cách riêng biệt.
Ví dụ 1(1):
Hoạt tính thủy phân đối với các chất nền amide khác nhau
| Chất nền | Hoạt động cụ thể μmol/phút-1mg-1 | Chất nền | Hoạt động cụ thể μmol/phút-1mg-1 |
| Acetamide | 3.8 | ο-OH benzamide | 1.4 |
| Propionamide | 3.9 | p-OH benzamide | 1.2 |
| Lactamide | 12,8 | ο-NH2benzamide | 1.0 |
| Butyramide | 11,9 | p-NH2benzamide | 0,8 |
| Isobutyramide | 26.2 | ο-Toluamide | 0,3 |
| Pentanamide | 22.0 | p-Toluamide | 8.1 |
| Hexanamide | 6.4 | Nicotinamide | 1.7 |
| Cyclohexanamide | 19,5 | Isonicotinamide | 1.8 |
| Acrylamide | 10.2 | Picolinamide | 2.1 |
| Metacrylamide | 3.5 | 3-Phenylpropionamide | 7.6 |
| Prolinamide | 3.4 | Indol-3-acetamide | 1.9 |
| Benzamide | 6.8 |
Phản ứng được thực hiện trong dung dịch đệm natri photphat 50mM, pH 7,5, ở 70 ℃.
| Amit | Hydroxylamin | Hydrazine |
| Acetamide | 8.4 | 1.4 |
| Propionamide | 18.4 | 3.0 |
| Isobutyramide | 25.0 | 22,7 |
| Benzamide | 9.2 | 6.1 |
Phản ứng được thực hiện trong dung dịch đệm natri photphat 50mM, pH 7,5, ở 70 ℃.
Nồng độ thuốc thử tương ứng: amit, 100 mM (benzamit, 10 mM); hydroxylamin và hydrazin, 400 mM; enzyme 0,9 μM.
Ví dụ 2(2):
Ví dụ 3(3):
1. D'Abusco AS, Ammendola S., et al. Những người cực đoan, 2001, 5:183-192.
2. Guo FM, Wu JP, Yang LR, et al. Hóa sinh quá trình, 2015, 50(8): 1400-1404.
3. Zheng RC, Jin JQ, Wu ZM, et al. Hóa học hữu cơ sinh học, 2017, Có sẵn trực tuyến 7.
